Нові методи діагностики COVID-19

Поведінка нового коронавірусу, який викликає COVID-19, вивчають вчені з усього світу. Вдосконалюються методи діагностики, спрямовані на виявлення в організмі SARS-CoV-2. Наприкінці 2020 року на ринку лабораторних досліджень були представлені більше 300 різних тестів:

• ПЛР-тести;
• тести на антиген;
• серологічні тести на визначення антитіл (імуноглобулінів).
   

ПЛР і антиген-тести дозволяють виявляти частинки коронавірусу в організмі на момент проведення дослідження і вказують на те, що людина може бути потенційним джерелом зараження оточуючих. Серологічні тести на визначення антитіл (імуноглобулінів) показують наявність імунної відповіді організму при зустрічі з вірусом.

ДІЛА однією з перших приватних лабораторій України почала тестування на COVID-19 методом ПЛР і має унікальний для України експертний досвід, набутий на базі 241 184* проведених тестів!

Від самого початку пандемії і використання для діагностики COVID-19 методу ПЛР, лабораторія ДІЛА удосконалює технологію і впроваджує інноваційні методики (FTD™ (Fast Track Diagnostics) - запатентована європейська технологія, яка не вимагає повторного підтвердження). ПЛР - це полімеразна ланцюгова реакція зі зворотною транскрипцією в режимі реального часу. На сьогодні це єдиний метод, визнаний у всьому світі золотим стандартом діагностики COVID-19. Однак проведення цього дослідження може мати деякі обмеження:

• екстрені випадки, коли час очікування результату може обернутися катастрофою (наприклад, при терміновій госпіталізації; станах, які загрожують життю);
• потреба у регулярному тестуванні великої кількості людей з групи ризику (наприклад, які проживають в будинках для людей похилого віку, медпрацівників).
   

Однією з останніх розробок стали тести на визначення специфічних антигенів вірусу SARS-CoV-2. У них є як переваги, так і недоліки: вони більш доступні і результат можна отримати прямо на місці тестування протягом 20 хвилин. Однак чутливість цих тестів нижча у порівнянні з ПЛР, тому результат тесту на АГ, як правило, безпосередньо залежить від величини вірусного навантаження. Антиген-тести в мазку з носо-, ротоглотки виявляють білки коронавірусу SARS-CoV-2, які синтезуються в ході реплікації і результат також дуже залежить від якості і місця взяття матеріалу. На сьогодні багато компаній по всьому світу зайняті розробкою тестів для виявлення антигенів коронавірусу SARS-CoV-2. Однак це дослідження має свої особливості і обмеження застосування. Які саме, розкажуть експерти ДІЛА.

*Дані Центру громадського здоров'я МОЗУ станом на 01.02.2021 р

У чому полягають відмінності методу ПЛР і антиген-тесту

Метод ПЛР - золотий стандарт діагностики, регламентований Міністерством охорони здоров'я України та рекомендований Всесвітньою організацією охорони здоров'я для встановлення наявності/відсутності збудника коронавірусної хвороби.

ДІЛА пропонує вибір ПЛР досліджень в залежності від необхідності терміну отримання результату:

• Коронавірус (SARS-Cov-2), COVID-19, РНК RT-ПЛР-якісний, FTD (терміновий) (12 годин);
• Коронавірус (SARS-Cov-2), COVID-19, РНК методом RT-ПЛР-якісний (24 години).
   

Коли показаний ПЛР тест:

• за наявності клінічних проявів інфекції COVID-19;
• для диференційної діагностики інших гострих респіраторних інфекцій, які мають схожий перебіг з коронавірусною інфекцією, викликаною SARS-CoV-2;
• при наявності контактів з особами, у яких лабораторно підтверджено COVID-19;
• при наявності пневмонії або важких ускладнень (ТГРС – тяжкого гострого респіраторного синдрому);
• груп ризику (цукровий діабет, серцево-судинні захворювання, вік старше 60 років, хронічні захворювання легень, ожиріння, вагітність, імунодефіцитні стани);
• для визначення безсимптомного перебігу коронавірусної інфекції.
   

ПЛР тест спрямований на виявлення молекули РНК (генетичного матеріалу) вірусу SARS-COV-2 в зразку біоматеріалу. Проводиться у спеціальному приладі - ампліфікаторі, який охолоджує і нагріває пробірки зі зразками біоматеріалу та сумішшю реагентів. Суть методу полягає у багаторазовому копіюванні (ампліфікації) окремих фрагментів РНК (таргетних генів) збудника хвороби, який імовірно знаходиться у зразках біоматеріалу. Той цикл ампліфікації, на якому знайдено вірус позначається показником Ct.

Метод має високу чутливість і дозволяє виявити збудника хвороби навіть при наявності декількох молекул його РНК, тобто на дуже ранніх стадіях інфікування або вже у період одужання (коли вірус виводиться з організму) і у випадках, коли хвороба жодним чином себе не проявляє, маючи безсимптомний перебіг. Також йому властива висока специфічність - в досліджуваному матеріалі визначається унікальний, характерний тільки для даного збудника фрагмент РНК.

Сучасні можливості ПЛР діагностики дозволяють відповісти на питання: присутній чи ні вірус в даному мазку, а також визначити вірусне навантаження (ВН), тобто як багато вірусних частинок міститься в 1 мл досліджуваного матеріалу (може бути високим, середнім, низьким). Від показника ВН безпосередньо залежить контагіозність (заразність) інфікованої людини для оточуючих.

Матеріалом для ПЛР дослідження на визначення COVID 19 може служити мокрота, змиви з бронхів, кал

Як визначається ВН і що означає показник Сt**.

Для умовного визначення вірусного навантаження (ВН) використовують показник «пороговий цикл», позначений в результаті аналізу як Сt (Сycle threshold). Він показує, скільки циклів ампліфікації відбулося для досягнення порогу виявлення вірусної РНК в зразку. З кожним циклом кількість копій РНК подвоюється. Чим більше вірусних частинок в зразку, тим швидше їх виявить тест-система і тим нижче буде показник Ct.

Зазвичай ПЛР в реальному часі відбувається протягом 40 циклів. Після кожного циклу оцінюють наявності світіння (флюоресценції) від мічених фрагментів РНК збудника.

Результат ПЛР залежить від рівня вірусного навантаження, а ВН, в свою чергу, - від стадії захворювання. Але це може абсолютно не поєднуватися з клінічними проявами:

• якщо клінічні симптоми захворювання відсутні (безсимптомний перебіг), а ПЛР тест позитивний з високим рівнем вірусного навантаження - людина заразна для оточуючих, оскільки виділяє велику кількість вірусів з носоглотки при диханні, розмові.
• клінічні прояви захворювання можуть бути відсутні при будь-якому рівні вірусного навантаження, тобто людина може бути високозаразною, а симптомів ГРВІ при цьому може не бути.

**Число Ct - умовний показник визначення вірусного навантаження

Тест для визначення антигену SARS-CoV-2 заснований на виявленні в біоматеріалу специфічного білка, який належить нуклеокапсиду коронавірусу.

Для дослідження використовується той же матеріал, що і в більшості випадків для проведення ПЛР - зішкріб з носо-і ротоглотки. Великим плюсом є те, що результат можна отримати на місці вже через 20 хвилин. Також позитивним моментом є його вартість - експрес-тести більш доступні, так як для проведення тестування не потрібно дороге обладнання, кваліфікований персонал, сучасні лабораторії.

Тест на антиген здатний виявити присутність COVID-19 в тому випадку, коли вірусне навантаження високе, тобто в носоглотці знаходяться сотні тисяч і мільйони копій вірусу, що частіше буває на початку захворювання або в період розпалу коронавірусної хвороби. При середньому або низькому вірусному навантаженні тест може дати хибно негативний результат.

В основному експрес тести призначені для «швидкого реагування»:

• якщо важкому пацієнтові потрібно терміново визначитися з діагнозом для призначення терапії;
• коли немає можливості провести ПЛР;
• на прийомі у лікаря при наявності симптомів ГРВІ для уточнення діагнозу;
• в екстрених випадках (госпіталізація за життєвими показаннями);
• для масового тестування населення в місцях високого рівня поширення захворювання;
• при потребі регулярного тестування групах підвищеного ризику (людей, що проживають в інтернатах, будинках для людей похилого віку, медпрацівники, доглядальниці).
   

Позитивний результат тесту на антиген при наявності симптомів захворювання свідчить про те, що людина хвора на COVID-19. Однак якщо результат тесту позитивний, а прояви відсутні, необхідно протягом найближчих двох днів провести ПЛР тест для підтвердження отриманих результатів тесту на антиген.

Негативний тест на антиген не виключає наявність COVID-19:

• в країнах/містах з високим рівнем захворюваності;
• при наявності сімейного контакту;
• при наявності клінічної картини ГРВІ, при наявності пневмонії, важкого гострого респіраторного синдрому.
   

В даному випадку для підтвердження антиген-тесту використовується ПЛР.

Також даний вид тестування не рекомендується для проведення особам з підозрілим і ймовірним випадком COVID-19 без клінічних проявів, у яких кількість вірусів в носоглотці може бути невеликою і швидкий АГ тест просто не зможе їх виявити.

Негативний тест на антиген не є висновком про одужання після коронавірусної хвороби, дозвільним документом для дострокового зняття з самоізоляції в сервісі «Дій вдома» в разі прибуття з країн «червоної зони». У цих випадках також потрібен результат ПЛР.

Імунохемілюмінесцентний аналіз (ІХЛА) - методика виявлення антитіл (імуноглобулінів) IgM і IgG до коронавірусу. В ДІЛА проводиться визначення:

• Коронавірус (SARS-CoV-2) COVID-19, антитіла IgМ до S білка, напівкількісний
• Коронавірус (SARS-CoV-2) COVID-19, антитіла нейтралізуючі IgG до S1 RBD, напівкількісний
• Коронавірус (SARS-CoV-2) COVID-19, комплекс антитіл IgМ до S-білка/IgG до N-білка, напівкількісний
   

ІХЛА дозволяє підтвердити або виключити факт зустрічі з вірусом SARS-COV-2 і оцінити наявність імунної відповіді до нього. Метод спрямований на напівкількісне виявлення антитіл до SARS-COV-2, які вказують на те, що людина зараз хвора на COVID-19 (IgM) або перехворіла раніше (IgG), а також дає можливість оцінити імунну відповідь в динаміці.

ІХЛА - метод серологічної діагностики, що має вагомі переваги в порівнянні з методом ІФА (імуноферментний аналіз):

• Більш висока чутливість і специфічність методу забезпечує точний результат;
• Повна автоматизація процесу знижує ймовірність помилки;
• Скорочення термінів отримання результату.
   

ІХЛА дослідження показані:

• Тест на антитіла IgM - підтвердження гострої стадії захворювання:

• при наявності симптомів ГРВІ та негативних результатах ПЛР-дослідження;
• при неможливості провести ПЛР протягом доби (контактним особам або при наявності симптомів);
• при госпіталізації.

• Тест на антитіла IgG - визначення контакту з коронавірусом SARS-COV-2 раніше:

• після перенесеної інфекції, викликаної коронавірусом;
• особам, у яких раніше були прояви ГРВІ та вони стурбовані щодо можливого безсимптомного перебігу захворювання.

• Комплексне визначення IgM і IgG - отримання найбільш повної інформації про наявність/відсутність контакту людини з SARS-CoV-2.
   

Сумарне визначення антитіл підвищує діагностичну цінність дослідження і дозволяє визначити комбінацію імуноглобулінів в ході одного дослідження, не прив'язуючись до часу інфікування. Також, в найближчому майбутньому завдяки дослідженню ви зможете:

• дізнатися чи потрібно вам вакцинуватися, або можливо у вас вже сформований імунітет;
• визначити, чи сформувався імунітет після вакцинації.
   

Імуноглобуліни (антитіла) кожного класу з'являються, а потім знижуються нижче межі виявлення у певний відрізок часу, який залежить від індивідуальних особливостей організму. Наприклад, антитіла можуть почати вироблятися набагато пізніше, або якщо антитіла класу М вже знизились нижче межі визначення, то прилад визначить антитіла класу G, і навпаки. В такому випадку визначення сумарних антитіл має значні переваги у порівнянні з окремим визначенням IgG і IgM за рахунок більшого часового діапазону визначення імунної відповіді та дозволяє перекрити такі «серологічні вікна», що значно підвищує чутливість тест-систем.

Як використовуються тести для діагностики COVID-19

Різні тести служать для різних цілей.

Дослідження на антитіла lgM дозволяє:

• виявити недавнє інфікування, гостру фазу перебігу інфекції COVID-19;
• дізнатися, чи є імунна відповідь організму, а саме гостра фаза перебігу COVID-19.
   

Дослідження на антитіла lgG дозволяє:

• визначити наявність імунної відповіді (виробилися захисні антитіла) на зустріч з вірусом SARS COV-2. Ознака перенесеного захворювання в минулому.
   

Експрес-тести на визначення антигену SARS-CoV-2

Вони спрямовані на пряме визначення антигену (нуклеокапсидного білку) SARS-CoV-2 імунохроматографічним методом у зразках мазків з носоглотки людини, що дозволяє з високою ймовірністю припустити інфікування вірусом (SARS-CoV-2).

Дослідження методом ПЛР дозволяє:

• виявити РНК вірусу COVID-19;
• при позитивному результаті тесту засвідчити наявність вірусу в організмі людини в даний час;
• результат ПЛР-тестування дозволяє прийняти рішення про лікування COVID-19.
   

Діагностичний експрес-тест - скринінгове дослідження, виправдане в умовах обмеженої доступності ПЛР, а також коли тривалість очікування результату ПЛР-дослідження виключає його клінічну ефективність. Він дозволяє безпосередньо на місці отримати якісну оцінку щодо зараження. Тому експрес-тести доречні, якщо результати потрібно отримати максимально швидко в осіб з підозрілим і ймовірним випадком COVID-19. Крім того, дослідження методом полімеразної ланцюгової реакції потрібно у всіх офіційних випадках: при виїзді за кордон, повернення з країн з високим рівнем поширенням інфекції з метою дострокового припинення самоізоляції. У всіх цих випадках в якості підтвердження відсутності інфекції SARS-CoV-2 розглядаються виключно результати ПЛР.

Швидкий тест на антиген можна здати в окремих відділеннях, попередньо заповнивши Анкету-направлення на сайті