Cроки выполнения
Фагоцитоз – комплекс реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма микроскопических частиц.
Многие типы клеток в той или иной степени способны к фагоцитозу, однако для иммунной системы наибольшее значение имеет фагоцитарная активность именно нейтрофилов.
При этом выделяют несколько основных этапов фагоцитарного процесса:
• Адгезия – прилипание клеток к микробам.
• Поглощение микроба, с образованием фагосомы.
• Дегрануляция – выброс специальных микробоцидных факторов в фагосому, содержащую поглощенного микроба.
• Окислительный взрыв – резкое снижение рН в фаголизосоме.
• Гибель и деградация микроба в фаголизосоме под действием микробоцидных факторов и низкого рН.
Сбой хотя бы на одном из указанных этапов приводит к так называемому неэффективному фагоцитозу.
К примеру, нейтрофилы могут присутствовать в крови в нормальном количестве, проявлять полноценную хемотаксическую и поглотительную активность, но при этом не убивая поглощенные микроорганизмы.
Возможен вариант, когда в лабораторных тестах фагоциты демонстрируют высокий окислительный потенциал (метаболический резерв), однако нарушен процесс распознавания и поглощения микробов.
Недостаточно эффективно процесс очистки организма от патогенов будет проходить и в том случае, если концентрация нейтрофилов в крови по каким-либо причинам снижена.
Именно поэтому функциональную активность гранулоцитов следует оценивать комплексно.
В нашей лаборатории используется тест-система, которая позволяет проводить реакцию в условиях цельной крови, в присутствии опсонизирующих факторов сыворотки, что намного повышает объективность исследования.
Гранулоциты не подвергаются предварительному выделению и отмывке.
Помимо этого, оценка фагоцитоза с помощью проточной цитометрии позволяет избежать ряда недостатков традиционного метода микроскопирования в мазках.
Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит, наличие в анамнезе тяжёлых бактериальных и/или грибковых инфекций, хронические воспалительные заболевания бактериальной природы, рецидивирующие гнойные лимфадениты, абсцессы внутренних органов, хронический гранулематоз, частый/длительный лейкоцитоз и наличие других маркеров воспаления.
Маркер функциональных нарушений фагоцитов.
Диагностика функциональной активности гранулоцитов позволяет диагностировать некоторые первичные и вторичные иммунодефициты фагоцитарного процесса.
Тест с дигидрородамином (DHR-тест) является «золотым стандартом» диагностики хронической гранулематозной болезни, также позволяет опосредованно определить женщин-носителей патологического гена при Х-сцепленной форме заболевания. Существенное снижение (1/10 от нормального значения) показателей теста отмечается при дефиците миелопероксидазы (требует проведения дифференциальной диагностики с хронической гранулематозной болезнью). Вторичные нарушения фагоцитарного процесса могут отмечаться при терапии глюкокортикостероидами, ВИЧ-инфекции, диабете, тяжёлых хирургических вмешательствах, ряде других хронических заболеваний.
Фагоцитарная активность
Метод: Проточна цитофлюориметрія
Диапазон измерений: до 100
Единица измерения: %
Референтные значения:
| Возраст | М | Ж | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0 - 120Л | 80 - 100 | 80 - 100 |
Стимулированная окислительная интенсивность
Метод: Проточна цитофлюориметрія
Диапазон измерений: не применяется
Единица измерения: Средняя интенсивность флуоресценции
Референтные значения:
| Возраст | М | Ж | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0 - 120Л | > 50 | > 50 |
Спонтанная окислителная интенсивность
Метод: Проточна цитофлюориметрія
Диапазон измерений: не применяется
Единица измерения: Средняя интенсивность флуоресценции
Референтные значения:
| Возраст | М | Ж | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0 - 120Л | < 2 | < 2 |
Гранулоциты
Метод: Проточна цитофлюориметрія
Диапазон измерений: не применяется
Единица измерения: x10*9/л
Референтные значения:
| Возраст | М | Ж | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0 - 120Л | 1.2 - 6.8 | 1.2 - 6.8 |
Индекс стимуляции
Метод: Проточна цитофлюориметрія
Диапазон измерений: не применяется
Референтные значения:
| Возраст | М | Ж | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 0 - 120Л | > 30 | > 30 |
венозная кровь
За 8 часов Выдержать голодание, исключить жирную пищу. Можно пить воду. За 2 часа допускается легкий прием нежирной пищи: детям до 5 лет и взрослым с противопоказаниями по голоданию. Непосредственно перед обследованием не курить. исключить физические нагрузки и стрессы. Согласовать с врачом применение глюкокортикоидных гормонов, цитостатических, иммуносупрессирующих и иммуностимулирующих препаратов (амиксин, тилорон и др.).
венозная кровь
Биоматериал для исследования:
венозная кровь.
Тип пробирки, объем БМ в пробирке:
Вакутейнер с натрий-гепарином, 4,0 мл.
Условия доставки:
Температура от 18 до 25 градусов,
24 ч.
Высокая спонтанная активность может свидетельствовать о системном воспалительном процессе, активации фагоцитов в периферической крови.
Сниженная окислительная интенсивность. Крайне низкие показатели (1/10 и ниже от нормы) окислительной интенсивности после стимуляции E.coli и PMA являются диагностическим маркером дефицита миелопероксидазы (MPO) и хронической гранулематозной болезни (ХГБ). Для дифференциальной диагностики между дефицитом МРО и ХГБ необходимо дополнительное обследование – тест с нитросиним тетразолием (НСТ-тест), который при дефиците МРО будет нормальным, а при ХГБ – сниженным. Интенсивность окислительного взрыва (индекса стимуляции) зависит от мутации сразу нескольких ферментов NADPH-оксидазного каскада. Если у пациента женского пола встречается две субпопуляции стимулированных гранулоцитов, различающихся по интенсивности окислительного взрыва, то это может свидетельствовать об Х-сцепленном носительстве дефицитного гена хронической гранулематозной болезни CYBB. Незначительные отклонения от нормы теста с дигидрородамином (DHR-тест) могут отмечаться при дефиците глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (GP6PD) и при некоторых других дефектах фагоцитоза, однако они не являются специфичными. Если положительный контроль стимуляции (PMA) положительный, а тестируемый образец (стимуляция E.coli) отрицательный, то скорее всего образец крови содержит соли EDTA или цитрата в качестве антикоагулянта. Необходимо сделать перезабор БМ, используя антикоагулянт Na-гепарин. На показатели DHR теста существенное влияние может оказывать использование системных глюкокортикоидов, приводя к временному снижению его показателей.
Низкая фагоцитарная активность является опосредованным показателем наличия дефекта фагоцитоза. Может наблюдаться также при нарушении транспортировки крови и накоплении большого количества поврежденных фагоцитов, не способных отвечать на стимул. Низкая фагоцитарная активность может встречаться при сепсисе, диабете и других заболеваниях, характеризующихся общей сильной интоксикацией и/или истощением.
